...
Головна » Оптическая системы в биологических исследованиях

Строение микроскопа

Микроскоп (греч. μικρός — маленький и σκοπέω — смотрю) — прибор, предназначенный для получения увеличенных изображений, а также измерения объектов или деталей структуры, невидимых или плохо видимых невооружённым глазом.

Совокупность технологий и методов практического использования микроскопов называют микроскопией.

Конструктивные части микроскопа:

Механическая: основания, тубус, тубус содержатель, предметный столик, револьвер, макровинт, микровинт, винт конденсатора.
Оптическая система: окуляр и объктив(малого, большого, иммерсионного увеличения)
Осветительная система: зеркало, окнденсор, диафрагма.
Правила работы с микроскопом:
1. Поставить микроскоп прямо перед собой, ручкой штатива к себе;
2. Установить объектив малого увеличения против отверстия предметного столика на расстоянии 1-2 см от него;
3. Осветить поле зрения зеркалом;
4. Вращая винт конденсора, добиться яркого изображения;
5. Положить препарат на предметный столик, покровным стеклом вверх;
6. Смотря в окуляр, осторожно вращать макровинт на себя, пока не пока не появиться изображение;
7. Чтобы перейти на большое увеличение, надо глядя сбоку, вращением револьвера установить объектив х40 над препаратом до щелчка. Затем вращением микровинта на себя или от себя добиться четкого изображения;
8. По окончании работы с микроскопом перевести револьвер на малое увеличение;
9. Смотреть в микроскоп левым глазом, не закрывая правый.

Увеличения светового микроскопа= увеличение окуляра х увеличение объектива

Разрешающая способность микроскопа - способность микроскопа давать раздельное изображения двух точек, лежащих исключительно близко друг от друга. Ограничена длинной волны луча света. Для светового микроскопа разрешающая способность равная 200 нм.

Методы цитологических исследований


1. Метод световой микроскопии – позволяет изучить форму , размер, структуру клеток, клеточных органелл на живых и фиксированных препаратах, окрашенных и не окрашенных.
2. Метод электронной микроскопии – позволяет изучать ультраструктуру клетки и клеточных органелл. Использует поток электронов в вакууме вместо луча свет и электромагниты вместо линз. Разрешающая способность 0,1 нм.
Виды электронной микроскопии:
-трансмиссионная – даёт плоскостное чёрно-белое изображения объекта
-сканирующая – даёт объемное 3D-изображение.
3. Метод дифференциального центрифугирования(фракционированье) – позволяет получить отдельные фракции органелл под действием центробежной силы в центрифуге.
4. Метод гистологии и гистохимии – изучает локализацию различных химических веществ в тканях на фиксированных и окрашенных препаратах.
5. Метод авторадиографии(изотопный метод) –использует маркирования нужных молекул изотопным индикатором, позволяет выявить распределите веществ в объекте, его состав и интенсивность метаболизма(молекулярные процессы) .
6. Метод культуры тканей – позволяет изучать живые объекты их деления и рост вне организма. Используют в искусственных питательных средах в пробирках.
7. Метод микрохирургии – позволяет удалять и имплантировать отдельные органеллы, пересаживать их из клетки в клетку и разделять их в ткани.

Гистологическая обработка ткани

Гистологической обработке предшествует биопсия – прижизненное иссечение части тканей организма для микроскопического исследования.
1. Фиксация – это воздействие химическими (формальдегид, этанол и другие) или физическими агентами (замораживание) на ткани в течении 15 минут для коагуляции белков и прекращения процессов жизнедеятельности.
2. Обезвоживание – это удаление воды в спиртах восходящей концентрации ( от 50 до 100 градусов)
3. Пропитывание растворителем(ксилолом, хлороформом или эфиром) – осуществляется для облегчения проникновения в ткани заливочной среды.
4. Пропитывания жидким парафином – в специальные формочки на 2-3 для заливается смесью парафина и ксилола для насыщения тканей
5. Изготовления блоков с тканями – заключается в вырезании парафинового блока с тканью и наклейке его на деревянный брусок густым парафином.
6. Получение срезов с помощью микротома – требует применения специальных прибора – микротома. Блок неподвижно фиксируют в объектодержателе микротома , после чего делают срезы необходимой толщины(5-15 мкм). Затем их снимают с ножа.
7. Депарафинирование – срезы опускают сначала в теплый ксилол вместе с предметным стеклом для растворения парафина, затем в 96% этанол и подсуживают.
8. Окраска биологических структур с помощью красителей:
Основные красители связываются со структурными клетками, имеющими кислую рН (ядрышко, хроматин, цитоплазма). К основным красителям относятся: гематоксилин, метиленовый синий, тионин, азур. Структурные клетки, окрашиваемые основными красителями называют базофильными.
Кислые красители – пикриновая кислота, фуксин, эозин. Связываются со структурными клетками, имеющие щелочную среду рН (цитоплазма, лейкоциты, коллагеновые волокна ) и придают им цвет красителя. Их называют оксифильными.
Нейтральные красители представляют собой смеси основных и кислых компонентов, как судак III. Ими окрашиваются гранулы нейтрофильныхх лейкоцитов и цитоплазма. Называют нейтрофильными.
9. Заключение в бальзам – помещения срезов в канадский бальзам после обезвоживания в спиртах восходящих концентрациях. Иногда препараты заключают в водорастворимые среды(глицерин, желатин) либо в их смеси.